论坛管理层注意：政治空气笼罩涿鹿板块   文件棍子帽子满天飞舞....... [复制链接]

论坛管理层注意： ,9MNB3  
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                政治空气笼罩涿鹿板块，  ,9MNB3  
                文件棍子帽子满天飞舞， ,9MNB3  
                疑是一场文革又将来临， ,9MNB3  
                公平辩论无法正常进行。 ,9MNB3  
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         只好封口！                   ,9MNB3  

属学术争鸣范畴 n}fV$qu  
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只是你们带上了政治的身份 n}fV$qu  
n}fV$qu  
还是回归学术吧 n}fV$qu  
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我写过学术论文 n}fV$qu  
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曲老师的许多帖子可以发表在期刊上 Sz')1<  
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使者大哥的还不行 Sz')1<  
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至少格式就过不了编辑这一关 Sz')1<  
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希望使者大哥继续努力 Sz')1<  
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让这场争论回归学术 Sz')1<  
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个人观点请你自重，我不知道你披着什么马甲，记住，不再与你等言语，纯属没有必要，请自重！

轩辕博士，我知道你是谁，请做个正直实在真诚的人，不要再四处穿梭，散布情况，挑拨矛盾，怎么这样做人呢？勿回帖，本人不想再与你言语！

你看看你自己的所有帖子，哪一个不是政治帖子？你懂学术吗？你的所谓“学术”，只是一层外包装！而且还包不严实，一捅就漏馅！ '5[(QM5Gi&  

我支持使者，使者的帖子我很关注。

辩论可以，大家探讨学术上的有争议的东西也可以，但是这里是论坛，不是谁家的后院！谁都可以来，这是每个人的自由，至于楼主说的那些，我个人并不这样认为！我们大家都应该自重！记住呦，是每个人而不是某一个人！ l@GJcCufE  
这里的一些帖子，我不想编辑，更不想删除！只要是不反党，不反国家，不反人类，不破坏社会的和谐与稳定，这些帖子我是不会删除的！至于是否同意我的意见，大家可以探讨！！

原代细胞的取材 \NDW@!X  
一、取材的基本要求 \NDW@!X  
（1）取材要注意新鲜和保鲜  新鲜组织易于培养成功，取材时应尽量在4~6h内能制作成细胞，尽快入箱培养，若不能即时培养，应将组织浸泡于培养液内，于4℃存放。若组织块较大，应在清除表面血块、坏死组织、脂肪和结缔组织后，切碎于培养液内4℃存放，但时间不能超过24h。对于已切碎的组织或血液、淋巴组织应加入含10%二甲基亚砜 (DMSO) 的培养基，按细胞冻存方式于液氮中冷冻保存。 \NDW@!X  
（2）取材应严格无菌  所取标本材料应在无菌条件下进行，为了确保无菌，对所取材料若疑有污染的可能，应将所取组织在含高浓度抗菌素（400单位/mL）甚至加入适量的两性霉素B或10%达克宁液的培养液内于4℃下存放2小时以上，再用PBS洗2~3次，以确保所取材料无菌。要用无菌包装的器皿或事先消毒好的带少许培养液（内含400单位/mL抗菌素）的小瓶等便于携带的物品来取材，所取材料应避免接触有毒有害的化学物质，如碘、汞等。 \NDW@!X  
（3）取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。 \NDW@!X  
（4）要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。 \NDW@!X  
（5）取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。取材时应尽量选用易培养的组织进行培养。 \NDW@!X  
（6）原代细胞取材时要同时留好组织学标本和电镜标本。对组织的来源、部位、包括供体的一般情况要做详细的记录，以备以后查询。 \NDW@!X  
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原代细胞的分离和制作 \NDW@!X  
人或动物体内（或胚胎组织）由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，即使采用1mm3的组织块，也只有少量处于周边的细胞可能生存和生长，若需获取大量细胞，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来，常采用的方法如下： \NDW@!X  
一、悬浮细胞的分离方法 \NDW@!X  
　组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟，若悬液量大，可适当延长离心时间，但速度不能太高，延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞，离心沉淀用无钙、镁PBS洗两次，用培养基洗一次后，调整适当细胞浓度后再分瓶培养，若选用悬液中某些细胞，常采用离心后的细胞分层液，因为，经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞 ． \NDW@!X  
二、实体组织材料的分离方法 \NDW@!X  
（一）机械分散法 \NDW@!X  
　　所取材料若纤维成分很少，如脑组织，部分胚胎组织可采用剪刀剪切、用吸管吹打分 \NDW@!X  
散组织细胞或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内（用九号针），使细胞通过针头 \NDW@!X  
压出，或在不锈钢纱网内用钝物压挤（常用注射器钝端）使细胞从网孔中压挤出。此 \NDW@!X  
法分离细胞虽然简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差。此法仅适 \NDW@!X  
用于处理纤维成分少的软组织。 \NDW@!X  
（二）消化分离法 \NDW@!X  
1、酶消化分离法 \NDW@!X  
酶消化分离法常采用胰蛋白酶和胶原酶，其分离方法如下： \NDW@!X  
（１）胰蛋白酶分散技术   \NDW@!X  
    胰蛋白酶（简称胰酶）是广泛应用的消化剂。胰蛋白酶是一种胰脏制品，对蛋白质有水介作用，主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键，使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开．胰蛋白酶对细胞的作用，取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等。 \NDW@!X  
　①细胞类型  胰蛋白酶适于消化细胞间质较少的软组织,能有效地分离肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等。而对含结缔组织较丰富的组织,如  乳腺、滑膜、子宫、纤维肉瘤、肿瘤组织等就无效． \NDW@!X  
　②酶的浓度  胰蛋白酶一般采用的浓度为0.1%-0.25%(活力1:200或1:250)． \NDW@!X  
分离方法如下： \NDW@!X  
　①过夜冷消化  将取得的组织用Hanks液洗三次，剪成碎块大小为4毫米左右，用Hanks液洗2~3次以除去血球和脂肪组织，再加入0.25%的胰蛋白酶，摇匀后放4℃过夜，次日再用Hanks液洗涤，弃去上清，共洗2~3次，然后，加入少量营养液吹打分散，细胞计数，按适当的浓度分瓶培养。 \NDW@!X  
（２）胶原酶（Collagenase）消化法 \NDW@!X  
适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质有较好的消化作用．可用PBS和含血清的培养液配制，即操作简便又可提高细胞成活率，最终浓度200u/mL或0.1～0.3mg/mL。 \NDW@!X  
2、非酶消化法（EDTA消化法） \NDW@!X  
　常用不含钙、镁离子的PBS配成0.02%的工作液，对一些组织，尤其是上皮组织分散效果好． \NDW@!X  
消化分离法的操作步骤： \NDW@!X  
（1）剪切  把组织块剪碎，呈1~5mm3大小的组织块。 \NDW@!X  
（２）加液漂洗  将碎组织块在平皿（或三角烧瓶）中用无钙镁PBS洗2-3次（采用倾斜，自然沉降法）。 \NDW@!X  
（3）消化  加入消化液（胰蛋白酶或胶原酶或EDTA）于37℃水浴中作用适当时间（中间可轻摇1~2次），若组织块膨松呈絮状可终止，若变化不大可更换一次消化液，继续消化直至膨松絮状为止。胰蛋白酶消化时间不宜过长。 \NDW@!X  
（4）弃去消化液  采用倾斜自然沉降或低速离心法尽量弃去消化液。 \NDW@!X  
（5）漂洗  将含有钙、镁离子的培养基沿瓶壁缓缓加入，中止消化反应，采用漂洗法洗2-3次后，加入完全培养基。 EUPc+D3  
（6）机械分散  采用吸管吹打或振荡法，使细胞充分散开后用纱网或3~4层无菌纱布过滤后分瓶培养，若要求不高可采用倾斜自然沉降5~10分钟，吸上层细胞悬液进行分瓶培养。 EUPc+D3  
EUPc+D3  

博士，你不想毕业找工作了？

那个是我的专业 6B+?X5-6DH  
学术问题 6B+?X5-6DH  
不属政治的 6B+?X5-6DH  
6B+?X5-6DH  
我还要凭那个毕业呢！ 6B+?X5-6DH  

引用楼主三祖使者于2010-08-06 22:58发表的 论坛管理层注意：政治空气笼罩涿鹿板块   文件棍子帽子满天飞舞....... : [a$1{[|)  
论坛管理层注意： [a$1{[|)  
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                政治空气笼罩涿鹿板块，  [a$1{[|)  
                文件棍子帽子满天飞舞， [a$1{[|)  
                疑是一场文革又将来临， [a$1{[|)  
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什么叫“文件棍子满天飞”呢？难道转载一下文化部、国家文物局发出的文件，就是棍子吗？如果是“棍子”，就是要打捧蚩尤、扭曲中华传统历史文化内涵与价值者！ [a$1{[|)  
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大家再瞧瞧这说话的口气：“论坛管理层注意”！这显然是上级领导训斥下级的口气，当官当得还不大，就学得如此官气十足，这就是当不了大官的根源，你沾不住四两膘！ [a$1{[|)  
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山雨欲来，风满楼

我支持大家，观点不同，但出发点是一致的，那就是朋友们都深深爱着你们的家乡---涿鹿！

引用第12楼五台一散人于2010-08-08 16:42发表的  : 7H)tF
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我支持大家，观点不同，但出发点是一致的，那就是朋友们都深深爱着你们的家乡---涿鹿！[表情] 7H)tF
&  

7H)tF
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我同意五台一散人大哥的观点

州官放点火吧，

引用第14楼韩歌于2010-08-08 16:49发表的 : i0$*):b  
州官放点火吧，[表情] i0$*):b  

i0$*):b  
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哈哈！无知的州官放火好多年了！现在，文化部、国家文物局联合下《通知》，胡总书记针对文化发展有讲话，难道还要写劝进之言，要他们顶风放火？ i0$*):b  

百姓也点灯吧~~

文件怎么会是棍子，要是棍子，上级就不会下达了

看看以前！

我赞同！您的导向是非常重要的！

双方都是戴着学术面具行人身攻击之实，很无聊。

论坛可以交流，不要攻击